Дифференциально-диагностические среды

 

Их применяют для первичного выделения возбудите-

ля из исследуемого материала. При приготовлении диф-

ференциально-диагностических сред к обычной среде

добавляют углеводы, индикаторы, а к некоторым — ин-

гибиторы и антибиотики. При размножении микроор-

ганизмов в дифференциально-диагностических средах

происходит изменение цвета индикатора, питательной

среды, самих колоний, что позволяет отличить одни

виды бактерий от других (среды Гисса, агар Эндо, Леви-

на, Плоскирева и т. д.).

 

 

Среды для индикации бактерий группы
кишечных палочек (БГКП)

 

Среда Хейфеца — выпускается в сухом виде. В со-

став, кроме основных питательных компонентов (вода,

пептон, маннит, натрия хлорид), входят розоловая кис-

лота, раствор метиленового синего. Готовая среда крас-

но-фиолетового цвета, при росте кишечной палочки рН

сдвигается в кислую сторону и среда приобретает зелено-

ватую окраску

ХБ (хинозол-бромкрезол-пурпурная среда). В 1 л

воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 5 г

маннита. Приготовленную смесь кипятят 15–20 мин,

 

фильтр, фильтрат кипятят 10 мин, охлаждают до 60С,

после чего прибавляют 30 мл дрожжевого диализата,

15 мл желчи, 10 мл раствора хинозола и 10 мл 1,6%-ного

спиртового раствора бромкрезола пурпурного. Среду

разливают в стерильные пробирки по 7–8 мл. При росте

БГКП эта среда окрашивается в желтый цвет.

Среда Кесслера. К 1000 мл дистиллированной

воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи.

Смесь кипятят на водяной бане при помешивании

20–30 мин, фильтруют через вату, добавляют 2,5 г

ют в пробирки с поплавками по 8–10 мл и стерилизу-

318

ТЕМА 4

 

лактозы, доводят объем дистиллированной воды до

1000 мл, устанавливают рН 7,4–7,6, добавляют 2 мл

1%-ного водного раствора генцианвиолета, разлива-

 

ют при температуре 121С в течение 10 мин. Готовая

среда имеет темно-фиолетовый цвет. Желчь и генци-

анвиолет являются ингибиторами грамположитель-

ных бактерий, подавляя их размножение, облегчают

индикацию кишечной палочки. Помутнение среды и

появление газа в поплавках свидетельствуют о нали-

чии кишечной палочки.

Среды Гисса. Эти жидкие или полужидкие питатель-

ные среды применяют для изучения сахаролитических

свойств бактерий. Основой этих сред служит 1%-ная

пептонная вода, к которой добавляют 0,5% хлорида

натрия и 0,5% одного из углеводов (глюкоза, лактоза,

сахароза, маннит) и индикатор Андраде (готовая среда

желтого цвета) или индикатор бромтимоловый синий

(сине-зеленого цвета). Готовую среду разливают в про-

бирки по 5–6 мл. В пробирки с жидкой средой помеща-

ют «поплавки» для улавливания газа; в полужидких

средах при наличии фермента, расщепляющего углево-

ды до конечных продуктов, появляются пузырьки газа

в глубине среды.

Среда Эндо. Выпускается в сухом виде. В ее состав

входят МПА, 1% лактозы и фуксин, обесцвеченный

сульфидом натрия, готовая среда бесцветная. Эта сре-

да применяется для дифференциации БГКП от сальмо-

нелл. Только кишечная палочка расщепляет лактозу,

входящую в состав агара Эндо до молочной кислоты,

которая восстанавливает обесцвеченный фуксин. Ко-

лонии эшерихий в кислой среде приобретают красный

цвет с металлическим блеском, а сальмонеллы, не рас-

щепляющие лактозу, образуют бесцветные, неокра-

шенные колонии, что позволяет дифференцировать их

друг от друга.

Среда Левина. Выпускается в сухом виде. В ее со-

став входят также МПА, 2% лактозы, а в качестве ин-

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

319

 

дикатора — эозин с метиленовым синим. Готовая среда

красно-фиолетового цвета. Бактерии эшерихии, рас-

щепляющие лактозу, на этой среде образуют колонии,

окрашенные в темно-фиолетовый цвет, а сальмонел-

лы — бесцветные.

Агар Плоскирева. Выпускается в сухом виде. Пред-

назначен для выделения сальмонелл, содержит лактозу

и компоненты, подавляющие рост сопутствующей ми-

крофлоры, т. е. ингибиторы (желчные соли, цитрат на-

трия, тиосульфат натрия, бриллиантовый зеленый, йод,

нейтральный красный). Готовая среда оранжево-крас-

ная, колонии сальмонелл бесцветные, а эшерихии —

кирпично-красного цвета. Агар Плоскирева по класси-

фикации является дифференциально-диагностической

и селективной средой, поэтому его рекомендуют приме-

нять при обильном обсеменении исследуемого материа-

ла сопутствующей микрофлорой.

 

 

Селективные среды

 

Селективные (накопительные, элективные) среды

разнообразные и очень сложные по своему составу, мо-

гут быть плотными и жидкими. Эти питательные среды

рекомендуют применять для накопления и выделения

возбудителя из исследуемого материала, обильно обсе-

мененного посторонней микрофлорой. В них добавляют

ингибиторы (анилиновые краски, желчь, антибиотики),

подавляющие рост сопутствующей микрофлоры, обес-

печивающие преимущественные условия для размно-

жения выделяемого возбудителя. Жидкие селективные

среды в научной литературе называют средами обогаще-

ния, или накопления, их рекомендуют применять, когда

в исследуемом материале предполагается незначитель-

ное содержание возбудителя и надо увеличить числен-

ность выделяемого микроба и подавить размножение

нежелательной микрофлоры.

теллура — 10 г;

рН раствора 6,8–7,1, стерилизуют при температуре

водный) Na HPO — 7 г;

водный) NaH PO — 3 г;

Смесь растворов соединяют и стерилизуют при темпе-

ческий — 36 г;

водный) KН РО — 1,5 г;

121С 30 мин. 2.       Натрий селенистокислый (NaHFeO ) без примеси

4

2

4

2

4

2

320

ТЕМА 4