Метод иммунофлюоресценции (ИФ).

Этот метод выполняется с использованием люминесцентной микроскопии. Относительно свечения микроскопических объектов в литературе используют термины «люминесценция» и «флюоресценция» как однозначные. Вторичная (наведенная) люминесценция достигается путем обработки исследуемого материала химическим красителем (флюорохромом). В зависимости от применяемого красителя и его концентрации достигается свечение объекта от желто-зеленого до красно-оранжевого. Люминесцентная микроскопия выполняется с иммерсионным нефлюоресцирующим маслом.

ИФ используется для диагностики антигена возбудителя в биологическом материале, в котором содержится возбудитель. Для выявления антигенов микоплазм, уреаплазм, хламидий материал для исследования является соскоб эпителия слизистой оболочки уретры, цервикального канала. Исследуемый материал, содержащий антиген, наносится на предметное стекло, фиксируется спиртом и обрабатывается гомологичной сывороткой, меченой флюорохромом. При связывании антигена с антителом появляется яркое свечение, обнаруживаемое с помощью люминесцентной микроскопии.

В зависимости от способа окраски различают прямой и непрямой методы ИФ. Прямой метод ИФ: на препарат наносится люминесцирующая сыворотка, после соединения с антигенами меченные флюорохромом антитела дают свечение. Непрямой метод ИФ проводится в два этапа. Первый этап: на препарат наносится нефлюоресцирующая гомологичная сыворотка, комплексы антиген-антитело не флюоресцируют. Второй этап: на препарат наносится флюоресцирующая сыворотка против полученных комплексов антиген-антитело.

Преимущества ИФ:

- выполняются единичные исследования;

- простота и высокая скорость выполнения;

- возможность применения для скрининга, экспресс-диагностики;

- можно применять для исследования микропрепаратов из парафиновых блоков для диагностики внутриутробных инфекций.

Недостатки ИФ:

- низкая чувствительность и специфичность;

- субъективность в оценке мазка;

- невозможность документирования;

- точность диагностики зависит от качества взятия материала (обязательны клетки цилиндрического эпителия);

- низкая информативность для контроля излеченности, так как флюоресцируют антигены нежизнеспособных микроорганизмов.

 

 

Приложение 7

 

Культуральный метод.

Этот метод основан на выделении возбудителей в чувствительной культуре клеток. Жесткие требования предъявляются к хранению и транспортировке клинического материала, который сразу после забора помещают в транспортную среду. После 24 часов хранения при температуре + 4 С или при – 20-70 С вероятность роста микроорганизмов на культуре клеток резко снижается. Для проведения этого исследования требуются: культура клеток, ростовая среда, изолирующая и транспортная среды.

Преимущества культурального метода:

 - оценка эффективности антибактериального лечения, так как на культуре клеток растут только жизнеспособные микроорганизмы;

- определение чувствительности и резистентности бактерий (хламидий) к антибактериальным препаратам;

- индивидуальный подбор химиопрепаратов.

 

Недостатки культурального метода:

- особенности транспортировки и хранения клинического материала;

- невозможность длительного хранения биоматериала;

- необходимость дополнительно использовать метод ПЦР для идентификации возбудителя;

- высокая стоимость и трудоемкость методики;

 - реальный срок получения результатов – 7 дней.

Для более точной диагностики необходимо в сопоставлении с клиническими данными использовать одновременно не менее двух методов лабораторной диагностики: один – для определения специфических антител, второй – для выделения возбудителя, определения его антигена или ДНК.

 

Приложение 8

Иммуноглобулины для внутривенного введения, зарегистрированные и

разрешенные к применению в Российской Федерации.

Стандартные (поливалентные) иммуноглобулины для

внутривенного введения:

 ИНТРАГЛОБИН Ф («BIOTEST PHARMA GMBH», Германия)

 ИММУНОГЛОБУЛИН НОРМАЛЬНЫЙ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ

ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ («Имбио», Россия)

 ИММУНОГЛОБУЛИН («BIOCHEMIE GMBH», Австрия)

 ОКТАГАМ («OKTAPHARMA AG», Швейцария)

САНДОГЛОБУЛИН («Novartis PHARMA services», Швейцария)

ЭНДОБУЛИН («IMMUNO AG», Австрия)

 БИАВЕН В.И. («PHARMA BIAJINI SPA», Италия)

ВЕНОГЛОБУЛИН («PASTER MERIEUX CONNAUGHT», Франция)

ВИГАМ-ЛИКВИД (Bio products laboratory, Великобритания)

ВИГАМ-С (Bio products laboratory, Великобритания)

 

Иммуноглобулины для внутривенного введения, обогащенные

антителами IgM, IgA:

ПЕНТАГЛОБИН («BIOTEST PHARMA GMBH», Германия)

 

Специфические (гипериммунные) иммуноглобулины для внутривенного

введения:

ЦИТОТЕКТ («BIOTEST PHARMA GMBH», Германия)

ГЕПАТЕКТ («BIOTEST PHARMA GMBH», Германия)

 

 

РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА

Основная

1. Шабалов Н.П. Неонатология: учеб. пособие: в 2 т./Н.П.Шабалов.-3-е изд.      испр. и     доп.-М.:МЕДпресс-информ,2004.-640с.

2. Неонатология: нац.рук-во/под ред.Н.Н.Володина.-М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.-848с.

Дополнительная

 

       1. Внутриутробные инфекции / Учебное пособие /Благовещенск:Буквица  2010. – 87 с.

/Романцова Е.Б., \ Шамраева В.В., \ Васильева Е.В., Рябых,И.И. Борисенко Е.П.

2. Григорьев К.И. Внутриутробные и неонатальные инфекции // Медицинская помощь. – 2004.- №5.- С. 7-15.

3. Перинатальные инфекции: Практич. пособие /Под ред. А.Я. Сенчука, З.М. Дубоссарской._ М.: МИА, 2005.- 318 с.

4. Протоколы диагностики, лечения и профилактики внутриутробных инфекций у новорожденных детей. Издание 2-е, переработанное и дополненное.- М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002.- 104 с.

    5. Халецкая, О.В. Состояние специфического иммунитета к герпетическим инфекциям у новорожденных с перинатальной патологией / О.В. Халецкая, В.В. Краснов, А.П. Обрядина, М.А.Суслова, Т.А. Запевалова, М.Е. Ионова, Е.В. Кункель // Нижегородский медицинский журнал. - 2006. - № 5. - С. 16-19.

       6. Халецкая, О.В. Комплексная оценка состояния здоровья детей раннеговозраста, инфицированных герпетическими вирусами в первомполугодии жизни / О.В. Халецкая, А.Ю. Шуткова, А.С. Федяева //Медицинский альманах. – 2010. - № 2. - С. 84-88.

       7. Халецкая, О.В. Роль герпетических инфекций в формировании затяжных вариантов течения гипербилирубинемий у новорожденных и детей раннего возраста / О.В. Халецкая, В.В. Солнцев // Медицинский альманах. – 2010. - № 2. - С. 100-102.