Опишите алгоритм микробиологического исследования в этом случае.

Для диагностики туберкулеза нужно различить 2 его формы (открытая или закрытая). Сначала мы исследуем мокроту или промывные воды бронхов (чаще мокроту). Проводим ее микроскопию. Суть: многократное проведение прямой микроскопии мазков, окрашенных по Цилю-Нельсену. Также возбудитель концентрируют путем флотации (бактериологии метод обогащения материала бактериями путем обработки его органическими растворителями, у которых удельная плотность меньше воды. Для этого материал, если он неоднородный, первоначально гомогенизируют (обычно путем выдерживания на водяной бане с калия или натрия гидроксидом), а затем к гомогенному материалу добавляют небольшое количество органического растворителя (ксилола, бензина), смесь энергично встряхивают и отстаивают. Микобактерий, содержащие много липидов, аккумулируются в верхнем слое растворителя, из которого приготовляют мазок или делают посев на среды.) В препарате можно обнаружить единичные микроорганизмы (сразу диагноз +) при условии, если в 1 мл мокроты содержится не менее 100.000 бактериальных клеток (т.е. диагноз + при обнаружении хоть 1 бактерии в 300 полях зрения (что делаем метод немного тяжким, т.к. слишком большое поле для исследования). Также делают маски с окраской с аурамином и смотрят в люминесцентный микроскоп. При обработке микобактерий люминесцентными красителями (аурамин, родамин и др.) эти вещества также связываются с воскоподобными структурами микробной клетки. При облучении окрашенных клеток возбуждающим источником света (определенный спектр ультрафиолетового излучения) они начинают светиться оранжевым или ярко-красным светом на черном или темно-зеленом фоне. В связи с высокой яркостью и контрастностью видимого изображения можно снизить общее увеличение микроскопа в 4-10 раз, чем расширяется поле зрения и уменьшается время просмотра препарата. Наряду с этим за счет значительно большей глубины резкости можно повысить комфортность исследования. При использовании флюоресцентной микроскопии на просмотр той же площади мазка затрачивают значительно меньше времени, чем при световой микроскопии мазков, окрашенных по Цилю-Нельсену. Если за рабочий день микроскопист просматривает примерно 20-25 таких мазков, то с помощью флюоресцентной микроскопии он может исследовать за то же время более 60-80 образцов. Окраска клеток смесью аурамина и родамина является в некотором роде специфической для кислотоустойчивых микобактерий, которые в этом случае имеют вид золотистых палочек.

Далее – бактериологический метод. Дает ответ о видовой принадлежности + чувствительность к антибиотикам. Недостаток – долго (3-8 нед.) Мокроту больного обрабатывают 2% серной кислотой, гомогенизируют и

А) Посев на среду Левенштейна-Иерсена (инкубация 2-4нед при 37 гр.) Среда, приготовленная на яичной основе, поддерживает рост различных видов микобактерий. Малахитовый зеленый, бензилпенициллин и налидиксовая кислота предотвращают рост большинства представителей сопутствующей флоры, в первую очередь той флоры, которая дает рост много раньше, чем микобактерии. РНК действует как стимулятор роста и позволяет повысить уровень высеваемости.

Затем проводят определения чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений на этой же среде. Общее время исследования может продлиться до 2 месяцев.

Б) Посев по Прайсу. Изготовляют мазки из патологического материала на нескольких хорошо обезжиренных и простерилизованных обжиганием предметных стеклах. Готовые мазки сначала погружают на 5 минут в 6% раствор серной кислоты, а затем промывают погружением в стерильный физиологический раствор. Промытые препараты вносят в жидкую питательную среду (1 часть цитратной крови и 3 части дистиллированной воды). Через 7-10 дней на мазках появляется рост в виде микроколоний, которые хорошо видны под микроскопом на мазках, окрашенных по Циль-Нильсену.

В) Реакция иммунофлюоресценции и ПЦР

Является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов.

Еще применяют биологический метод, при котором подкожно заражают морских свинок с последующим исследованием органов погибших животных. (Продолжительность – до 3 месяцев)

Все вышеперечисленные методы являются диагностикой открытой формы туберкулеза, когда микроорганизм выделяется во внешнюю среду. Но при закрытой форме – серодиагностика. Тут уже материал сыворотка больного. Реакция РНГА с антигенным эритроцитарным диагностикумом. Диагностический титр – 1/8. Но нужно помнить, что процесс может идти скудно и антител может и не быть.