Среды для индикации (выявления) сальмонелл

Магниевая среда состоит из трех растворов.
1.

 Пептон — 4,2;

 натрия хлорид — 7;

 дрожжевой экстракт — 20 мл;

 калий фосфорнокислый однозамещенный (без-

 

 вода дистиллированная — 890 мл.

Все перечисленные компоненты кипятят и прибавля-

ют растворы 2-й и 3-й.

2.

 Хлористый или сернокислый магний кристалли-

 

 вода дистиллированная — 90 мл.
3.

 0,1%-ный водный раствор бриллиантового зеле-

ного — 5 мл.

 

ратуре 121С в течение 30 мин.

Селенитовая среда (Ф-бульон) состоит из двух рас-

творов.

1.

 Натрий фосфорнокислый однозамещенный (без-

 

 натрий фосфорнокислый двузамещенный (без-

 

 пептон (чешский, венгерский) — 5 г;
 лактоза — 4 г;

 вода дистиллированная — 1000 мл.

 

 

3

 вода дистиллированная стерильная — 100 мл.

Стерилизация не требуется. Раствор можно хранить в

холодильнике 1–2 мес.

4

4 2

4

2

 натрия тиосульфат — 0,03 г;  0,4%-ный водный раствор фенолового красного

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

321

 

Для получения рабочей среды непосредственно перед

посевом к 100 мл раствора первого добавляют 4 мл рас-

твора второго. Готовая среда имеет рН 7, готовую среду

не хранят.

Среда Клиглера готовится из сухой питательной

среды.

Трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому.

 1,5%-ный рыбо- или мясопептонный агар, рН

7,2 — 100 мл;

 лактоза — 1 г;
 сахароза — 1 г;

 глюкоза — 0,1 г;
 мочевина —1 г;

 соль Мора (FeSO  (NH ) SO  6H O) — 0,02 г;

 

 

(фенолрота) — 0,4 мл.

Все ингредиенты, кроме фенолрота, растворяют в

небольшом количестве дистиллированной воды (10 мл)

на водяной бане. Затем вливают в расплавленный агар,

фильтруют, доводят до рН 7,2–7,4.

После этого добавляют фенолрот и разливают в про-

бирки по 5–6 мл. Стерилизуют осторожно в прогретом

автоклаве при температуре 112C (не выше) в течение

30 мин. Лучше стерилизовать текучим паром 20 мин

3 дня подряд. После стерилизации среду скашивают так,

чтобы оставался столбик высотой 3–4 см. Готовая среда

имеет бледно-розовый цвет.

Среда обогащения ЕЕ (в модификации Г. П. Калины)
предназначена для накопления сальмонелл. Входящие в

состав среды желчные соли и краситель подавляют раз-

витие сопутствующей микрофлоры.

Среда Кауфмана — это среда обогащения, предназ-

начена для культивирования сальмонелл, в ее состав

включают раствор Люголя, тиосульфат натрия, раствор

бриллиантового зеленого, бычьей желчи, подавляющих

рост сопутствующей микрофлоры.

322

ТЕМА 4

 

Среды для индикации золотистого стафилококка

 

Желточно-солевой агар применяют для выделения

стафилококков из загрязненного посторонней микрофло-

рой материала. К МПА добавляют 10% хлорида натрия,

а перед применением в расплавленный и охлажденный до

50С агар добавляют 20% стерильной желточной взвеси.

Патогенные стафилококки на этой среде вокруг колоний

образуют радужный венчик, такое явление называют ле-

цитоветилазной реакцией.

Солевой бульон. В 1000 мл рыбо- или мясопептонно-

го бульона (МПБ) растворяют 65 г хлористого натрия,

фильтруют, устанавливают рН 7–7,2, стерилизуют при

температуре 121С в течение 20 мин. Количество хлори-

стого натрия можно увеличить до 90 г.

Молочно-солевой агар. К 1000 мл расплавленного и
охлажденного до 45–60С РПА или МПА, содержаще-

го 65 г хлорида натрия (рН 7,2–7,4), добавляют асепти-

чески 100 мл стерильного обезжиренного молока. Среду

тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Молочно-солевой агар применяют для выделения ста-

филококков из исследуемого материала (гноя, молока),

в котором предполагается содержание посторонней ми-

крофлоры. Учитывая, что стафилококки относятся к га-

лофилам, содержание хлорида натрия в такой среде дово-

дят до 7,5%.

Агар типа Байрд — Паркер. В 1000 мл дистиллирован-

ной воды размешивают 30 г сухого питательного агара на

основе ферментативного гидролизата кормовых дрож-

жей, добавляют 10 г пирувата натрия, 5 г хлористого ли-

тия. Нагревают при помешивании и кипятят в течение

1 мин до полного растворения ингредиентов. Устанавли-

вают рН 7,2, стерилизуют при 121С в течение 15 мин.

Перед применением в растопленную и охлажденную

до 45–60С среду асептически добавляют (из расчета на

100 мл среды) 0,5 мл 2%-ного раствора теллурита калия

и 5 мл эмульсии яичного желтка.

раствора сульфита натрия (Na SO ) и 1 мл 5%-ного рас-

3

2

4

4

2

4

4

2

3

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

323

 

Среды для определения
сульфитредуцирующих клостридий

 

 

Среда Вильсон — Блера. К 100 мл стерильного рас-
плавленного и охлажденного до 80С РПА или МПА,

содержащего 1% глюкозы, добавляют 10 мл 20%-ного

 

твора железоаммонийных квасцов (Fe(NH )(SO )12Н О)

[можно заменить 1 мл 8%-ного раствора железа серни-

стокислого (FeSJ ), рН среды 7,5–7,8].

Растворы солей готовят непосредственно перед приме-

нением и стерилизуют текучим паром в течение 1 ч.

Сульфит-полимиксин-неомициновая среда (СПН).

В 1000 мл печеночного бульона асептически вносят 5 мл

10%-ного водного раствора сульфита железа закисного

(FeSO ),10 мл 10%-ного водного раствора сульфита на-

трия (Na SO ), полимиксина М — 200 000 ЕД, сульфата

неомицина В — 50 мг. Разливают в стерильные пробир-

ки по 9 мл.

Печеночный бульон. 500 г мелко нарезанной говяжьей

печени кипятят в 1000 мл дистиллированной воды в тече-

ние 1 ч. Устанавливают рН 7 и вновь кипятят в течение

10 мин. Затем процеживают через ткань, доводят объем

до 1000 мл и добавляют 10 г пептона и 5 г хлорида натрия.

Разливают во флаконы и стерилизуют при температуре

121С в течение 20 мин.

Среда Китта — Тароцци. В пробирки с 2–3 кусочка-

ми вареной рыбы, вареного мяса или вареной печени

наливают высоким столбиком рыбо-, мясопептонный

или печеночный бульон с 1% глюкозы. На поверх-

ность среды в пробирки наслаивают 1 мл вазелинового

масла. Можно готовить агаризованную среду, добавив

0,15% агара. Стерилизуют при температуре 121С в

течение 20 мин, рН 7,2 (надо проверить до и после сте-

рилизации).

324

ТЕМА 4

 

При приготовлении среды Китта — Тароцци без до-

бавления вазелинового масла или агара после посева на

поверхность среды наслаивают голодный агар.

Голодный агар. 2 г агара расплавляют при нагрева-

нии в 98 мл дистиллированной воды. Стерилизуют при

121С в течение 20 мин.

 

 

4.2. МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ
        ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ПОСУДЫ

 

 

Стерилизацией называют полное уничтожение всех

видов и форм микроорганизмов (вегетативных и споро-

вых) в стерилизуемых объектах.

Главными требованиями ко всем методам стерилиза-

ции являются их надежность и сохранение первоначаль-

ных свойств стерилизуемых объектов. В связи с боль-

шим разнообразием качества стерилизуемых объектов

разработаны различные методы стерилизации. При вы-

боре метода стерилизации необходимо учитывать каче-

ство стерилизуемого объекта, возможные изменения его

свойств под влиянием силы излучения, высокой темпе-

ратуры, химических реагентов и т. д.

Различают физический, химический и механический

методы стерилизации. К физическим методам стери-

лизации относят действие высокой температуры, уль-

трафиолетовых лучей (УФ), ионизирующей радиации,

ультразвука. Химические методы применяют для обра-

ботки вакцин, сывороток и других объектов, консерви-

руемых различными антисептиками. Механический ме-

тод рекомендуют для фильтрации жидкостей, которые

нельзя нагревать. Для этого применяют специальные

бактериальные фильтры, в порах которых остаются бак-

терии, но вирусы проходят.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

325