Санитарно-бактериологические показатели почвы

 

Оценка почвы

Общее количество
бактерий в 1 г

Коли-титр
почвы

Относительно чистая

Менее 10 тыс.

Выше 1

Умеренно загрязненная

Сотни тысяч

1–0,01

Сильно загрязненная

Миллионы

0,01–0,001

390

ТЕМА 13

 

Особую трудность представляет выделение сибире-
язвенных спор из почвы, так как в ней находится ог-

ромное количество различных микроорганизмов, в том
числе спорообразующих сапрофитных аэробов. Суще-

ствующие бактериологические методы не всегда позво-
ляют выделить возбудителя сибирской язвы из почвы.

Основная трудность состоит в отделении спор от частиц
почвы. Из многих известных методов более надежным
является метод предварительной подготовки пробы по-

чвы по следующей методике:

1) 100 г исследуемой почвы заливают 5–10-кратным
объемом стерильного фосфатного буфера или воды;

2) шуттелируют взвесь в течение 20–30 мин, с после-
дующим отстаиванием в течение 5–8 мин;

3) фильтрование через 2–3 слоя марли;

4) прогревание полученной суспензии в водяной бане
в течение 30 мин при 70С для уничтожения сопутствую-

щей вегетативной микрофлоры;

5) посев суспензии на поверхность МПА в чашках
Петри для получения изолированных колоний, а из них

чистой культуры;

6) полученной культурой заражают 5–10 белых мы-
шей, подкожно в дозе 0,1–0,2 мл;

7) вскрытие павших мышей и выделение чистой
культуры возбудителя сибирской язвы из органов трупа.

Для выделения чистой культуры возбудителя сибир-
ской язвы из исследуемого материала, загрязненного по-
сторонней микрофлорой, предложены селективные среды,
в состав которых вводят 200–500 ЕД/мл полимиксина в
сочетании с триметопримом, которые подавляют рост ме-

зофильных бактерий B. subtilis, B. cereus и E. coli.

 

 

ЗАДАНИЯ

ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

 

1. Провести бактериологическое исследование раз-

личных образцов почвы методом серийных разведений

для определения количества МАФАнМ посевом в чашки

Петри. Чашки поставить в термостат.

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЧВЫ

391

 

2. На следующем занятии провести подсчет количест-

ва выросших колоний, определить количество МАФАнМ

в 1 г исследуемой почвы.

3. Провести демонстрацию посева исследуемых

образцов почвы в среды Кесслера для определения коли-

титра.

 

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

 

1. Перечислите правила отбора проб почвы.

2. В чем заключается суть метода серийных разведений при

определении количества МАФАнМ?

3. В чем заключается суть определения коли-титра исследу-

емой почвы?

4. С какой целью добавляют в питательные среды полимик-

син и триметоприм при выделении чистой культуры сибир-

ской язвы?

Тема 14

 

САНИТАРНО-
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ

ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

 

 

Цель занятия. Овладеть различными методами исследо-

вания количественного и качественного состава микрофлоры

воды.

Материалы и оборудование. Пробы водопроводной и реч-

ной воды, чашки Петри, расплавленный МПА в пробирках

высоким столбиком, стерильные пипетки на 1 мл, стерильный

физраствор по 9 мл. Для демонстрации: прибор Зейтца с колбой

Бунзена, водоструйный вакуумный насос, мембранные филь-

тры № 3, среда Эндо в чашках, глюкозопептонные среды (ГПС)

с индикатором и поплавками, разлитые в пробирки и колбы.

Колбы и пробирки с ГПС с посевами воды для демонстрации

метода бродильных проб с положительными результатами.

Таблицы. Схема определения коли-титра воды.

 

Вода является естественной средой обитания многих

микроорганизмов. Особую опасность для здоровья чело-

века и животных представляют патогенные бактерии,

которые могут быть в воде.

Источниками загрязнения воды патогенными ми-

кроорганизмами являются выделения больных живот-

ных и людей, трупы животных, сточные воды, особенно

предприятий, перерабатывающих животное сырье и др.

Длительность выживания патогенных микробов в воде

разведения, заливают расплавленным и охлажденным

это невозможно, то хранят не более 6 ч обязательно при

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

393

 

зависит от их вида, условий окружающей среды и мо-

жет составлять от нескольких часов до нескольких лет.

Так, возбудитель сибирской язвы может сохраняться в

воде до 3 лет, возбудитель туберкулеза до одного года, а

бруцеллы — до 100 дней. Имеется группа болезней, для

которых характерен водный путь распространения (па-

ратифы, лептоспирозы).

Таким образом, вода может стать источником рас-

пространения инфекционных болезней, возникновения

эпидемий и эпизоотий. Для санитарно-бактериологиче-

ской оценки воды проводят следующие исследования:

1) определение общего микробного числа или

МАФАнМ в 1 мл;

2) определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ);

3) обнаружение в воде патогенных микроорганизмов

проводят по эпидпоказаниям.

При санитарно-микробиологических исследованиях

пробы воды забирают из источника в объеме не менее

500 мл. Из открытых водоемов пробу воды отбирают ба-

тометром. Батометр — стерильная емкость с пробкой в

металлическом каркасе и свинцовым грузилом. На нуж-

ной глубине пробку открывают, подтягивая ее за вере-

вочку. Воду из рек, озер отбирают с глубины 10–15 см от

поверхности, а при небольшой глубине — на расстоянии

10–15 см от дна.

Для отбора проб водопроводной воды из крана наби-

рают 500 мл в стерильные колбы с ватной пробкой с со-

блюдением правил асептики. Кран предварительно сте-

рилизуют обжиганием горящим спиртовым тампоном,

затем в течение 10 мин спускают воду. Пробы воды ис-

следуют тотчас или не позднее 2 ч с момента взятия, если

 

1–5С в холодильнике.

Определение количества МАФАнМ в водопровод-
ной воде. В чашку Петри с соблюдением правил асепти-

ки вносят 1 мл водопроводной воды без предварительно

 

до 50С МПА (методом горячей заливки). Посевы инку-
бируют 24–48 ч в термостате при 30С. После указанно-

–1

до

–4

жденным до 50С МПА. После инкубирования при 30С

394

ТЕМА 14

 

го срока приступают к подсчету количества колоний,

выросших как на поверхности, так и в глубине агара.

Учитывают только те разведения, при посеве которых

на чашках вырастает от 30 до 300 колоний. При посеве

воды без разведений количество бактерий в 1 мл воды бу-

дет равно количеству выросших колоний.

Определение количества МАФАнМ в воде открытых
водоемов. Исследуемую воду, учитывая ее загрязнен-
ность, предварительно разводят стерильной водой в за-

висимости от предполагаемого загрязнения от 1:10

1:10 , из двух последних разведений вносят по 1 мл в

стерильные чашки и заливают расплавленным и охла-

 

в термостате в течение 24–48 ч подсчитывают количе-

ство колоний, умножают на степень разведения воды и

определяют количество бактерий в 1 мл воды открытых

водоемов.

 

14.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИ-ТИТРА
           И КОЛИ-ИНДЕКСА ВОДЫ

 

Коли-титром (КТ) называют наименьший объем

воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка.

Коли-индекс (КИ) показывает число кишечных пало-

чек в 1000 мл воды.

Кишечная палочка является постоянным обитате-

лем кишечника человека и животных, следовательно,

ее присутствие в питьевой воде является индикатором

фекального загрязнения. Чем выше концентрация бак-

терий группы кишечной палочки, тем вероятнее присут-

ствие в исследуемой воде таких бактерий, как сальмо-

неллы, возбудители дизентерии и холеры. Показатели

КТ и КИ указывают на санитарное состояние воды, ее

пригодность в качестве питьевой.

При исследовании чистой воды удобнее пользовать-

ся методом мембранных фильтров, при исследовании

воды, содержащей механические частицы, затрудняю-

ют в 10 раз). Посевы воды в средах ГПС культивируют в

емкостью 250 мл с поплавками и по 1 мл в пробирки с

ных объемов исследуемой воды в среды накопления с

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

395

 

щие процесс фильтрации, лучше пользоваться бродиль-

ным методом.

Коли-титр и коли-индекс определяют двумя методами:

1) метод бродильных проб;

2) метод мембранных фильтров.

 

 

Метод бродильных проб

 

Суть этого метода заключается в посеве определен-

 

индикатором и поплавками, инкубации ее при 37С с

последующим пересевом из забродивших пробирок на

среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и вы-

числении коли-титра воды по нормативам.

Этот метод основан на ферментативной способности

бактерий группы кишечной палочки (БГКП) расщеплять

при помощи ферментов лактозу или глюкозу до кислоты

и газа. Исследуемая вода засевается в различных объе-

мах в глюкозопептонную среду (ГПС) с индикатором и

поплавками, при наличии кишечной палочки появляет-

ся помутнение, меняется цвет индикатора (желтый цвет

переходит в красный) и появляются пузырьки газа в по-

плавках. Воду методом бродильных проб исследуют в три

этапа.

Первый день. Засевают водопроводную воду в объ-

еме 333 мл (три объема по 100 мл, три — по 10 мл и

три — по 1 мл). При этом вода в объемах по 100 и 10 мл

засевается в колбы и пробирки с 10 и 1 мл концентриро-

ванной ГПС (в 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г

хлорида натрия, рН 7,4, разливают по 10 мл в колбы

 

поплавками, стерилизуют при 112С), а посев воды в

объеме 1 мл — в пробирки с 10 мл среды с нормальной

концентрацией (готовят как концентрированную, но

количество всех ингредиентов, кроме воды, уменьша-

 

термостате 24 ч при 37С.

методом, чтобы появились изолированные коло-

исследуемом объеме воды;

мов воды:

396

ТЕМА 14

 

Второй день. Учет результатов посева разных объе-

 

 отсутствие помутнения, образования кислоты и

газа в колбах и пробирках после посева воды сви-

детельствуют об отсутствии кишечной палочки в

 

 наличие кишечной палочки вызывает помут-

нение питательной среды, изменение цвета ин-

дикатора (красный цвет переходит в желтый) и

появление пузырька газа в поплавках. Из каж-

дого забродившего посева петлей делают пере-

сев штрихом на агар Эндо в чашках Петри таким

 

    нии. Посевы культивируют 24 ч при 37С.

Третий день. Учет результатов посева на агаре Эндо.

При отсутствии роста на агаре Эндо или при наличии

колоний, нехарактерных для БГКП, дается отрицатель-

ный ответ.

Из колоний, характерных для бактерий БГКП (крас-

ных с металлическим оттенком), готовят мазки, окра-

шивают по Граму, микроскопируют. Изучают культуру

по оксидазному тесту. Для этого на фильтровальную бу-

магу, пропитанную раствором нафтола-диэтил-n-фени-

лендиамина, наносят штрихом 2–3 колонии, снятые с

агара Эндо. Для кишечной палочки характерно: наличие

грамотрицательных палочек в мазке и отсутствие изме-

нений в окраске фильтровальной бумаги на оксидазный

тест, т. е. кишечная палочка относится к оксидазоотри-

цательным бактериям. При положительном результате

на оксидазный тест бумага, пропитанная индикатором,

приобретает ярко-синюю окраску (в течение минуты),

положительную реакцию дают БГКП, которые не учи-

тываются.

Наличие в мазках грамотрицательных бактерий с

отрицательной реакцией на оксидазный тест позволяет

дать положительный ответ на присутствие БГКП в ис-

следуемом объеме воды. Полученные результаты срав-

нивают с нормативами на питьевую воду (табл. 9).

из трех флаконов по 10 мл

из трех флако- нов по 100 мл

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

397

 

Таблица 9

Определение коли-титра и коли-индекса бактерий кишечных
                       палочек при исследовании воды

Количество положительных
результатов анализа воды

из трех
флаконов

По 1 мл

 

 

Коли-
индекс

 

 

Коли-
титр

1

2

3 4 5

0

0

0

< 3

> 333

0

0

1

3

333

0

1

0

3

333

1

0

0

4

250

1

0

1

7

143

1

1

0

7

143

1

1

1

11

91

1

2

0

11

91

2

0

0

9

111

2

0

1

14

72

2

1

0

15

67

2

1

1

20

50

2

2

0

21

48

2

2

1

28

86

3

0

0

23

43

3

0

1

39

26

3

0

2

64

16

1

2

3 4 5

3

1

0

43

23

3

1

1

75

13

3

1

2

120

8

3

2

0

93

11

3

2

1

150

7

3

2

2

210

5

3

3

0

240

4

3

3

1

460

2

3

3

2

1100

0,9

3

3

3

> 1100

< 0,9

одной чашке можно разложить четыре фильтра). Чашки

делают посев воды в желчно-лактозную среду с брилли-

398

ТЕМА 14

 

Для установления свежего фекального загрязнения

 

антовым зеленым. Посевы культивируют при 43С для

дифференциации кишечной палочки от хладнокровных,

не растущих при такой высокой температуре. Наличие

мути и газа указывает на присутствие в воде бактерий —

показателей свежего фекального загрязнения.