Метод мембранных фильтров

 

Суть этого метода заключается в концентрировании

бактерий из определенного объема исследуемой воды на

поверхности мембранных фильтров и выращиванием их

на поверхности агара Эндо и последующим учетом количе-

ства БГКП в 1 л воды. Метод мембранных фильтров эконо-

мичнее и дает возможность дать ответ на 2-й день.

Первый день. Готовят прибор Зейтца — протирают

спиртовым тампоном, обжигают в пламени спиртовки

металлические детали. Готовят мембранные фильтры

№ 3 из нитроцеллюлозы, с диаметром пор 0,7 мкм, ко-

торые задерживают на своей поверхности БГКП. Филь-

тры кипятят 10–15 мин в дистиллированной воде, затем

с соблюдением правил асептики при помощи пинцета

с гладкими кончиками фильтр матовой поверхностью

вверх кладут на сетку фильтрационного прибора Зейтца.

В воронку прибора наливают исследуемую воду, а в при-

емной колбе Бунзена создают вакуум при помощи водо-

струйного насоса. Исследуемая вода фильтруется через

мембранный фильтр, бактерии, находившиеся в ней,

остаются на поверхности. После окончания фильтрации

воды мембранный фильтр матовой стороной вверх пе-

реносят на поверхность агара Эндо в чашках Петри (на

 

ставят в термостат при 37С на сутки. Через поры мем-

бранного фильтра происходит диффузия питательных

компонентов среды Эндо, вследствие этого оставшиеся

БГКП размножаются и за сутки на поверхности фильтра

каждая палочка образует типичные колонии — красные

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

399

 

с металлическим оттенком, количество которых подсчи-

тывают.

Водопроводная вода засевается (фильтруется) в объ-

еме 333 мл, которые последовательно пропускают через

четыре фильтра по 200, 100, 30 и 3 мл воды.

Второй день. Учитывают наличие или отсутствие ко-

лоний на поверхности фильтров, находящихся на агаре

Эндо в чашках Петри.

Отсутствие колоний на поверхности фильтра или на-

личие колоний, нехарактерных для БГКП, позволяет

дать отрицательный ответ на присутствие кишечной па-

лочки в исследуемом объеме воды.

При наличии на фильтре колоний, характерных для

БГКП, красных с металлическим блеском, исследование

продолжают. Для этого готовят препараты из подозри-

тельных колоний, окрашивают по Граму, микроскопи-

руют. При обнаружении грамотрицательных палочек

ставят оксидазную пробу.

Отрицательная проба на оксидазу свидетельствует о

наличии в воде кишечной палочки, которая учитывает-

ся. В этом случае вычисляют коли-титр и коли-индекс.

Результат выражают в виде коли-индекса, определяемо-

го суммированием числа колоний кишечных палочек,

выросших на поверхности всех мембранных фильтров из

всех проб воды, и пересчета этого количества на 1000 мл

воды. Зная показатель коли-титра, можно определить

коли-индекс: для перевода коли-титра в коли-индекс

1000 делят на показатель коли-титра, а для перевода ко-

ли-индекса в коли-титр 1000 делят на число, выражаю-

щее коли-индекс.

Например, при исследовании пробы воды профиль-

тровано 3 объема по 100 мл. На первом фильтре выросло

3, на втором фильтре выросло всего 2 колонии, на треть-

ем — 10 колоний, т. е. в общей сложности на трех филь-

трах выросло 15 колоний.

Коли-титр этой воды будет равен:

300/15 = 20 мл,

т. е. 20 мл — это наименьший объем воды, в котором на-

ходится одна кишечная палочка.

вы бактериологических показателей:

1000

1000

1000

1000

коли титр

20

коли индекс

50

 коли-индекс не должен превышать 3

400

ТЕМА 14

 

Теперь, зная коли-титр, мы определяем коли-индекс

по формуле:

коли индекс воды   50;

 

коли титр   20.

 

Таким образом, коли-индекс исследуемой воды равен

50, т. е. в 1000 мл воды находится 50 кишечных пало-

чек, такой водой пользоваться нельзя, так как коли-ин-

декс питьевой воды должен быть не более 3.

Требования к санитарно-микробиологическому со-

стоянию воды представлены в таблице 10.

Таблица 10

Микробиологические нормативы
санитарного состояния воды

 

 

Объект контроля

Коли-
чество

МАФАнМ,
КОЕ, не

Более

 

Коли-
титр,

не
менее

 

Коли-
индекс,

Не более

 

Перио-
дичность

Контроля

Вода водопровод-

ная

100 в 1 мл

333

3

Один раз

в месяц

Вода открытых

водоемов

1000 в 1 мл

111

9

—

 

Для питьевой воды установлены следующие нормати-

 

 количество МАФАнМ в 1 мл — не более 100;
 коли-титр — не менее 333;

кишечных

палочек в 1000 мл.

Вода открытых водоемов считается доброкачествен-

ной, если количество МАФАнМ не более 1000, коли-

титр — не менее 111, коли-индекс — не более 9.

Наличие в воде патогенных бактерий устанавливают

путем посева на дифференциально-диагностические и

элективные питательные среды с последующей их иден-

тификацией методами, принятыми в микробиологии.

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

401

ЗАДАНИЯ