ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

 

1. Провести посев воздуха класса в чашки с МПА ме-

тодом Коха для определения количества МАФАнМ.

2. Провести посев воздуха класса методом Кротова

для определения количества МАФАнМ. Чашки с посева-

ми поставить в термостат.

3. На следующем занятии провести подсчет вырос-

ших колоний и определить количество МАФАнМ в 1 м .

 

 

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

 

1. В чем заключается сущность исследования воздуха мето-

дом осаждения по Коху?

2. В чем заключается преимущество метода Кротова?

3. Какие микроорганизмы, находящиеся в воздухе, отно-

сятся к санитарно-показательным?

Тема 13

 

САНИТАРНО-
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ

ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЧВЫ

 

Цель занятия. Дать общее представление о микрофлоре по-

чвы, источниках загрязнения. Овладеть различными метода-

ми бактериологического исследования почвы.

Материалы и оборудование. Образцы почвы в пакетиках по

1 г, стерильный физраствор по 9 мл в пробирках, стерильные

пипетки по 1 мл, стерильные чашки Петри, расплавленный

МПА в пробирках столбиком, пробирки со средой Кесслера,

агар Эндо в чашках Петри.

 

Почва является естественной средой обитания мно-

гих видов микроорганизмов. В ней имеются все условия

для благоприятного их развития: достаточное количе-

ство влаги, органических и минеральных веществ. По-

чвенные микроорганизмы участвуют в минерализации

органических отбросов, самоочищении почвы, в круго-

вороте веществ в природе.

В почву с выделениями больных, а также с трупами

животных, погибших от инфекционных болезней, со

сточными водами попадают патогенные микроорганиз-

мы. В связи с этим почва может служить источником

распространения возбудителей инфекционных болез-

ней, через почву загрязняются объекты окружающей

среды, может происходить обсеменение сапрофитными

и болезнетворными микроорганизмами сырья животно-

го происхождения, пищевых продуктов, кормов.

чвы включает определение следующих показателей:

щие



3

2

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЧВЫ

387

 

В составе микрофлоры почвы принято выделять так

называемые физиологические группы микроорганиз-

мов, которые участвуют в различных процессах и на

разных этапах постепенного разложения органических

веществ, к которым относятся:

1) аммонификаторы (гнилостные);

2) нитрифицирующие бактерии;

3) азотфиксирующие;

4) бактерии, расщепляющие клетчатку;

5) бактерии, участвующие в круговороте серы, желе-

за, фосфора.

В почве могут быть и патогенные бактерии, продол-

жительность их выживания зависит от вида и условий

внешней среды. Особое место занимают спорообразую

возбудители почвенных инфекций (сибирской язвы, зло-

качественного отека, эмфизематозного карбункула, столб-

няка, ботулизма), которые сохраняются в почве годами, а

возбудитель сибирской язвы — десятки и сотни лет.

Краткий санитарно-микробиологический анализ по-

 

 количество МАФАнМ в 1 г;
 коли-титра почвы;

в отдельных случаях в почве определяют наличие

возбудителей сибирской язвы для исключения

старых сибиреязвенных захоронений. Напри-

мер, при строительстве детских лагерей, новых

животноводческих помещений и т. д.

Отбор проб почвы. На обследуемой территории до

1000 м выделяют два участка по 25 м каждый: один

участок выбирают вблизи, другой — вдали от источника

загрязнения. С каждого участка отбирают среднюю про-

бу, составленную из 5 образцов, взятых по диагонали.

Образцы берут на глубине до 20 см, при исследовании

почвы скотомогильников — ниже глубины захороне-

ния не менее чем на 25 см. Пробы отбирают стерильной

железной лопатой или специальным буром в стериль-

ные широкогорлые банки, которые закрывают ватными

пробками. К банке приклеивают этикетку с датой и но-

мером образца.

–4

, для загрязненных — до 1:10 и больше.

–6

–1

–2

–6

6

–5

) бе-

вают 13 мл расплавленного и охлажденного до 50С МПА

Посевы культивируют в термостате 24–48 ч при 30С.

388

ТЕМА 13

 

Масса каждого образца должна быть 200–300 г, а

смешанного — не менее 1 кг. Отобранные пробы почвы

направляют в лабораторию и исследуют сразу же или не

позднее чем через 12–18 ч при обязательном хранении в

холодильнике.

 

13.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАФАнМ В 1 Г
           ПОЧВЫ МЕТОДОМ

           СЕРИЙНЫХ РАЗВЕДЕНИЙ

 

Методика. В производственных лабораториях в кол-

бу емкостью 500 мл наливают 270 мл стерильной водо-

проводной воды и вносят 30 г исследуемой почвы, затем

колбу с содержимым встряхивают в течение 10 мин. Из

полученного разведения почвы 1:10 готовят последую-

щие десятикратные разведения: для чистых почв от

1:10 до 1:10

В учебном классе удобнее делать разведения в пробир-

ках, для этого первое разведение готовят внесением 1 г

исследуемой почвы в пробирку с 9 мл стерильной воды,

из полученного первого разведения 1:10 переносят 1 мл

во вторую пробирку с 9 мл воды, получается разведение

1:100, и т. д. до 10 (в результате этих разведений умень-

шается концентрация бактерий и при посеве в чашки

Петри появятся изолированные колонии, подсчет кото-

рых облегчается).

Из двух последних разведений почвы (10 и 10

рут по 1 мл и переносят в стерильные чашки Петри (не

менее двух чашек на каждое разведение), которые зали-

 

и тщательно перемешивают (метод горячей заливки).

 

Учету подлежат чашки Петри, в которых выросло от

30 до 300 колоний. Колонии считают в каждой чашке

отдельно, определяют среднеарифметическое число по

двум чашкам. Полученное число колоний умножают на

степень разведения исследуемой почвы и получают чи-

сло бактерий в 1 г почвы.

почв от 1:10

–1

до 1:10

–3

–3

до

–6

культивируют при 43С в течение 48 ч (при такой тем-

ванных колоний. Посевы культивируют при 37С в те-

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЧВЫ

389

13.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИ-ТИТРА
          ПОЧВЫ МЕТОДОМ

          БРОДИЛЬНЫХ ПРОБ

 

Определение коли-титра почвы методом бродильных

проб с использованием среды Кесслера проводят в три

этапа. На первом этапе готовят разведения: для чистых

; для загрязненных — от 1:10

1:10 . После тщательного перемешивания 1 мл полу-

ченной суспензии из различных разведений переносят

в пробирки со средой Кесслера с поплавками. Посевы

 

пературе дает рост кишечная палочка только тепло-

кровных).

На втором этапе исследования просматривают посевы

на среде Кесслера. Из пробирок с наличием газа делают

высев на среду Эндо штрихом, для получения изолиро-

 

чение 24 ч.

На третьем этапе исследуют колонии, выросшие на

среде Эндо. Для этого отмечают и отбирают изолиро-

ванные колонии, типичные для бактерий БГКП, гото-

вят из них мазки, красят по Граму, микроскопируют.

При обнаружении в мазках коротких грамотрицатель-

ных палочек проводят высев из этих колоний на среду

Кесслера для подтверждения газообразования в чи-

стой культуре.

В таблице 8 приведены санитарно-микробиологиче-

ские показатели почвы, имеющей различную микроб-

ную загрязненность.

Таблица 8