Определение уробилиногена в моче

Принцип метода. Метод основан на реакции уробилиногенов с солью диазония в кислой среде и образовании комплекса конденсационных соединений красного цвета. Реакция высокоспецифична для уробилиногена и стеркобилиногена. Чувствительность диагностической зоны подобрана для физиологических границ (стеркобилиногена 6 мкмоль/л, уробилиногенурии или стеркобилиногенурии – 17 мкмоль/л) и слабо розовая окраска реактивной зоны оценивается как норма. Бесцветная зона свидетельствует о нормальном содержании стеркобилиногена в моче здорового человека.

Результат оценивается в течение первых 60 с. Появление окраски диагностической зоны визуально сравнивают с референтной шкалой, цвета которой соответствуют концентрации уробилиногенов 17-51-102-203 мкмоль/л (цв. вкл.ІІІ.7). Появление окраски после 60 с – реакция не учитывается, а содержание уробилиногенов в моче считается нормальным.

Определение эритроцитов, гемоглобина (миоглобина) в моче.

Принцип метода. Тест основан на способности гемоглобина и миоглобина катализировать окисление окрашенного индикатора (хромогена) стабилизированным органическим гидропероксидом. Тест высокочувствителен и специфичен к эритроцитам, гемоглобину и миоглобину. Чувствительность метода позволяет обнаружить до 5 эритроцитов в 1 мкл нецентрифугированной мочи и выявить присутствие гемоглобина, образовавшегося при гемолизе 10 эритроцитов, что соответствует 0,3 мг/л.

Результат теста оценивается через 60 с. Положительный результат теста выражается в изменении цвета диагностической зоны: в присутствии свободного гемоглобина или миоглобина диагностическая зона окрашивается от светло-зеленого до сине-зеленого цвета. Интенсивность окраски диагностической зоны пропорциональна количеству гемоглобина (цв. вкл. ІІІ.8).

Определение лейкоцитов в моче

Принцип метода. Метод основан на ферментативной реакции, катализируемой лейкоцитарной эстеразой. В результате этой реакции образуется свободный индоксил, который взаимодействует с солью диазония, в результате чего образуются продукты светло-фиолетового цвета.

Тест оценивается через 120 с (более поздний результат не учитывается). В присутствии нейтрофилов или продуктов их распада бесцветная диагностическая зона окрашивается в розовато-сиреневый, сиреневый или темно-сиреневый цвет – положительная реакция (цв.вкл. ІІІ.9). Метод специфичен только для нейтрофилов, способен выявить в моче продукты их распада, содержащие эстеразу. Чувствительность теста составляет 10 нейтрофилов в 1 мкл нецентрифугированной мочи.

Определение нитритов в моче

Принцип метода. Тест основан на определении нитритов, образующихся в моче из нитратов. Диагностическая зона полоски содержит модифицированный и стабилизированный реактив Грисса, который в присутствии нитритов принимает розовую окраску.

Тест оценивается в течение первых 60 с. Положительная реакция проявляется изменением окраски тест-зоны: при наличии 1.0 мг нитритов в литре мочи возникает слабо-розовое окрашивание тест-зоны, что соответствует 1х10⁵ бактерий в 1 мл мочи (цв.вкл. ІІІ.10). Чувствительность теста на нитриты составляет 70% всех случаев бактериурии. Отрицательный результат не исключает инфекцию почек и мочевого пузыря, т.к инфицирование может быть вызвано бактериями, которые не восстанавливают нитраты или их содержание в моче незначительно. Тест специфичен для нитритов – продуктов жизнедеятельности бактерий. Чувствительность метода – 0,5 мг NО₂⁻ /л или 0,05 мг/ 100мг нитритов.

Примечание: пробу на нитриты следует проводить в средней порции утренней мочи, не позднее чем через 4 часа после ее получения, чтобы было достаточно времени для восстановления бактериями нитратов в нитриты; за 3 дня до исследований отменяют антибиотики и препараты витамина С, а за день до пробы рекомендуют съесть достаточное количество овощей (шпинат, морковь, капусту).

Определение аскорбиновой кислоты в моче

Принцип метода. Тест основан на восстановлении аскорбиновой кислоты фосфомолибденовой кислоты в молибденовый синий. В результате восстановления фосфомолибденовой кислоты желтая окраска зоны индикации изменяется на светло-зеленый или темно-зеленый цвет.

Тест оценивается через 60 с. Положительный тест считается при изменении цвета тест-зоны от исходной желтой окраски на бледно-зеленоватую, светло-зеленую до темно-зеленого цвета (цв.вкл.ІІІ.11). Чувствительность метода 0,18-0,30 ммоль/л. Выраженной специфичности теста нет. Тест реагирует не только на аскорбиновую кислоту, но и на сильные восстанавливающиеся вещества, содержащиеся в моче (метаболиты аспирина, гомогентизиновая кислота).

СЛАЙД – ПЛАНШЕТЫ ДЛЯ МИКРОСКОПИИ ОСАДКА МОЧИ

В настоящее время в клинической диагностической лаборатории для микроскопии осадка мочи используют пластиковые слайд-планшеты, позволяющие провести исследование утренней порции мочи, исследовать мочу по методу Нечипоренко, Адиса-Каковского и другие камерные исследования.

Слайд-планшет – это приспособление разового пользования для подсчета количества форменных элементов в 1 мл мочи в стандартизированных условиях (рис. 21).

Планшет имеет размер предметного стекла (длина 8 см, ширина 3 см и толщина 1,7 мм) и содержит 10 камер для микроскопического исследования 10 образцов нативного или суправитально окрашенного осадка мочи и других биологических жидкостей (рис. 21 А, Б). Каждая из 10 камер слайд-планшета покрыта тонкой пластиковой пластинкой, размер и толщина которой соответствуют размеру и толщине покровного стекла 9x7 мм. Расстояние между поверхностью слайд-планшета и "покровным стеклом" обеспечивает однослойное расположение клеток. В каждой камере слайд-планшета слева расположены 2 серии окружностей по 9 в каждой. Они хорошо видны в проходящем свете и под микроскопом на малом увеличении.

На большом увеличении микроскопа (окуляр х10 и объектив х40) одна окружность занимает все поле зрения. Диаметр каждой окружности 0,376 мм, объем одной окружности 0,011 мкл. Объем каждой серии окружностей составляет 0,011 х 9 = 0,099 мкл или ~0,1 мкл. Следовательно, если количество клеточных элементов, подсчитанных в 9 окружностях камеры, умножить на 10, то можно получить количество клеточных элементов в 1 мкл исследуемой жидкости. Например: в 9 окружностях камеры слайд-планшета подсчитано 25 лейкоцитов, следовательно, в 1 мкл мочи содержится 25 х 10 = 250 лейкоцитов. Представление о количестве элементов организованного осадка мочи в ячейках камеры (лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров) можно получить на малом увеличении микроскопа с окуляром х10 или бинокуляром с окулярами х7 или х10 и объективом х20 (рис.21 А, Б). Точная дифференциация элементов на эритроциты, лейкоциты и цилиндры производится на большом увеличении микроскопа (объектив х40).

Исследование осадка мочи проводится как обычно: на малом увеличении обнаруживают и отмечают в бланке клетки переходного и плоского эпителия; на большом увеличении микроскопа отмечают количество лейкоцитов, эритроцитов и клетки почечного эпителия. Для этого просматривают 15-20 полей зрения и усредненные результаты записывают в бланк. Например: лейкоциты 10-15-20 в п/зр, клетки переходного эпителия - единичные в препарате и т.д.

Количество цилиндров, если их много, регистрируют только на большом увеличении микроскопа. Отмечается их количество в полях зрения. Например: гиалиновые цилиндры 0-1-3-5 в п/зр. Если цилиндров мало, их количество подсчитывают в препарате на малом (объективы х8, х10 или х20) увеличении микроскопа и полученная цифра регистрируется в бланке. Например: гиалиновые цилиндры - 10 в препарате, зернистые цилиндры - 2 в препарате, восковидные цилиндры - 1 в препарате.

Исследование мочи в слайд-планшете по методу Нечипоренко.

Доставленная в КДЛ моча, собранная после туалета наружных половых органов (желательно средняя порция), аккуратно, без пены перемешивается. 10 мл мочи помещается в мерную пластиковую центрифужную пробирку. Если мочи мало, то вся доставленная моча переливается в центрифужную пробирку (3, 6 или 8 мл) и центрифугируется со скоростью 1500-2000 об/мин в течение 10-15 мин.

Надосадочную мочу аккуратно удаляют с помощью полиэтиленовой пастеровской пипетки с резервуаром. В пробирке оставляют 1 мл мочи с осадком. Осадок осторожно, без пены перемешивают с мочой той же пипеткой и каплей осадка заполняют камеру слайд-планшета. Излишки мочи удаляют с поверхности покровного стекла камеры с помощью фильтровальной бумаги или ватного тампона.

Препарат помещают на предметный столик микроскопа, при увеличении х80 или х100 находят ячейки счетной камеры (3x3) и в них при увеличении х400 подсчитывают количество лейкоцитов и эритроцитов. Цилиндры обнаруживают при увеличении х80 или х100. Количество форменных элементов в 1 мл мочи рассчитывают по формуле:

N = (Xx10x1000)/ V,

где: N - количество форменных элементов в 1 мл мочи, X - количество форменных элементов в 9 окружностях камеры слайд-планшета, 10 - коэффициент пересчета количества форменных элементов в ячейках камеры слайд-планшета на содержание в 1 мкл мочи, 1000 – 1000 мкл мочи с осадком, взятое для микроскопического исследования, V - количество мочи в мл, взятое для центрифугирования.

Если для центрифугирования всегда берут 10 мл мочи, то окончательный вариант формулы следующий: N = X х 1000.

Нормальное количество форменных элементов в 1 мл мочи по Нечипоренко:

лейкоциты - до 2000/мл мочи;
эритроциты - до 1000/мл мочи;
цилиндры - до 20/мл мочи.

Метод Нечипоренко предназначен для диагностики скрытого воспалительного процесса, микрогематурии или скрытой цилиндрурии и для контроля результататов проведенного курса лечения.

Если при проведении общего анализа мочи количество форменных элементов в осадке утренней порции превышает норму, исследование этой мочи в камере по методу Нечипоренко или Каковского-Аддиса нецелесообразно!