Определение количества МАФАнМ

 

Отбор проб. Исследуемую рыбу и крупные экзем-

пляры нерыбных объектов морского промысла отби-

рают в количестве не более 3 штук. От каждого экзем-

пляра из нескольких мест вырезают кусочки с кожей и

мышцами, не затрагивая кишечник (за исключением

отбора проб на определение наличия парагемолити-

ческих вибрионов), площадью около 4 см , толщиной

4–5 мм и эти кусочки помещают во взвешенный ста-

кан. Вновь взвешивают и по разности весов устанав-

ливают массу отобранной пробы, ножницами измель-

чают и пробу заливают стерильным физраствором в

таком количестве, чтобы получить конечное разведе-

ние 1:10.

Подготовленную пробу тщательно перемешивают,

взвесь отстаивают в течение 5 мин. Надосадочную жид-

кость используют для приготовления последующих раз-

ведений. 1 мл из исходного разведения (10

пробирку с 9 мл стерильного раствора, не прикасаясь к

поверхности жидкости в этой пробирке, перемешивание

(или пипетирование) проводят новой стерильной пипет-

кой, и содержимое в количестве 1 мл переносят в сле-

дующую пробирку. В результате исследуемый продукт

должен быть разведенным в 10, 100 и более раз. Степень

разведения навески для высева на плотные питательные

среды выбирают так, чтобы общее количество колоний,

выросших на чашке, колебалось в пределах от 30 до 300.

Посев проводят по следующей методике: из двух послед-

них разведений вносят в чашки Петри по 1 мл разведен-

ного материала или смыва, заливают 15 мл расплавлен-

 

каждого разведения посев дублируют в три чашки). По-

сле застывания МПА чашки переворачивают вверх дном

 

случаях допускается предварительный учет колоний че-

рез 48 ч с окончательным подсчетом через 72 ч. Количе-

ство микроорганизмов в 1 г (1 мл) продукта определяют

по формуле

спор палочки, ферментирующие лактозу с образованием

460

ТЕМА 20

К = A 

B 

 

C,

где К — количество микроорганизмов в 1 г, КОЕ; A — сред-

нее арифметическое число колоний в чашке; B — степень

разведения; C — масса, объем, поверхность (г, мл).

Результаты выражают в колониеобразующих едини-

цах — КОЕ/(мл, г).

Для вычисления среднего арифметического нельзя

использовать посевы, где количество выросших коло-

ний на чашках менее 30.

При отсутствии роста колоний результаты фиксиру-

ют таким образом: «Количество микроорганизмов менее

одного».

Если при посевах оказалось, что во всех разведениях

на засеянных чашках менее 30 колоний, в результате

анализа рекомендуется написать: «Рост единичных ко-

лоний при посеве» и указать количество засеянного про-

дукта.

Если на поверхности чашек, более чем на 1/2 их пло-

щади, имеется расползающийся рост спорообразующих

микроорганизмов, подсчет изолированных колоний не-

возможен, в результате анализа следует написать: «Рост

спорообразующих микроорганизмов».

 

 

Определение бактерий группы кишечных палочек

 

Метод основан на способности бактерий группы ки-

шечных палочек сбраживать в среде Кесслера лактозу

с образованием кислоты и газа. Бактерии группы ки-

шечных палочек (БГКП) — это аэробные и факульта-

тивно-анаэробные, грамотрицательные, не образующие

 

кислоты и газа при температуре 37С в течение 24 ч (бро-

дильная проба), не обладающие окислительной способ-

ностью.

Для индикации БГКП в исследуемом материале 10 г

продукта и 10 мл исходного разведения продукта засе-

вают во флаконы со 100 мл и 50 мл питательной среды

соответственно. По 1 мл и 0,1 мл и т. д. исходного раз-

–1

в термостат при температуре 37С на 24 ч, затем из про-

, т. е. 0,1 г про-

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ ПРОИЗВОДСТВА РЫБЫ

461

 

ведения продукта вносят в пробирки с 5 мл питательной

среды. Засевается то количество продукта, в котором

нормируется отсутствие бактерий группы кишечных па-

лочек. Допускается засевать 1 г продукта в 10 мл пита-

тельной среды.

Для определения БГКП в смывной жидкости с обору-

дования и рук тампоны или марлевые салфетки опуска-

ют в пробирки с 5 мл среды Кесслера. Посевы помещают

 

бирок и колб с пузырьками газа в поплавках делают пе-

ресев на дифференциально-диагностическую среду Эндо.

Через сутки после инкубирования в термостате проводят

учет. При наличии на среде Эндо колоний (красных с ме-

таллическим блеском и без него, розовых), характерных

для группы кишечных палочек, проводят их изучение.

Из изолированных колоний готовят препараты, окра-

шивают по Граму и микроскопируют. При наличии гра-

мотрицательных без спор палочек делают заключение

о присутствии БГКП. Для уточнения при обнаружении

грамотрицательных, не образующих спор палочек надо

провести оксидазный тест: часть колонии со среды Эндо

наносят штрихом на фильтровальную бумагу, предвари-

тельно смоченную реактивом для определения цитохро-

моксидазы. Оксидазный тест у кишечной палочки отри-

цательный и индикаторная бумага не должна изменять

цвет (если бумага синеет — оксидазный тест положи-

тельный).